外泌體及內容物的可視化——基于全內部反射熒光的單囊泡成像測定技術
欄目:最新研究動態 發布時間:2019-07-26
一項能進行原位化學計量的技術:基于全內部反射熒光(TIRF)的單囊泡成像測定技術......

 外泌體(exosome)是一類由細胞分泌的30-150nm的小囊泡,exo在離開“母體細胞”時將帶走細胞內的部分蛋白質和復雜RNA,經膜融合釋放到胞外基質中,去到它想去的地方。這使得exo從默默無聞的小龍套成為研究細胞間對話(cross-talk)的大熱主角之一。
目前常用的的研究手段如q-PCR雖然可以對exo內含物的含量進行研究,但并不能在單囊泡水平對內含物進行原位化學計量,也就是說無法揭示單囊泡水平的表型異質性。今天小編給大家帶來的是一項能進行原位化學計量的技術:基于全內部反射熒光(TIRF)的單囊泡成像測定技術。
我們先來看一下該技術在研究腫瘤血漿exo中的應用:

首先,我們用CD63探針捕獲血漿中的exo,將exo固定在蓋玻片上;緊接著,加入可激活的適體探針(AAP)來檢測靶向含有PTK7的exo,當遇到PTK7-exo時,APP被激活,發出熒光。這是DNA納米裝置(ABDNs)放大熒光信號,在TIRF成像系統下檢測生成的ABDN即可用于定量分析。這一技術甚至可以直接觀察和量化微量血漿樣品(1μl)中的exo。
接下來,我們再來看一下如何用這一技術直接測定血清中外泌體內的microRNAs:首先,確定要研究的microRNA,設計與靶miRNA特異結合的DNA酶探針,用0.2 U mL -1 SLO通過可逆透化方法將DNA探針遞送到exo中,當探針與靶miRNA特異結合時激發熒光,通過TIRF成像系統下檢測熒光數和密度即可。

小編相信,隨著各種技術的不斷發展和成熟,人們對于exo的研究將更加深入和透徹。畢竟“科學技術是第一生產力”嘛!

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